一、試驗原理1,ELISA試劑盒是以免疫學反響為基礎,將抗原、抗體的特異性反響與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技能。免疫酶技能是將酶標記在抗體/抗原分子上,構(gòu)成酶標抗體/酶標抗原,稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反響后,作用于底物使之呈色,依據(jù)色彩的有無和深淺,定位或定量抗原/抗體。2,ELISA法是免疫酶技能的一種,其特點是利用聚苯乙烯微量反響板(或球)吸附抗原/抗體,使之固相化,免疫反響和酶促反響都在其間進行。在每次反響后都要反復洗刷,這既確保了反響的定量聯(lián)絡,也避免了末反響的游離抗體/抗原的別離進程。在ELISA法中.酶促反響只進行一次,而抗原的免疫反響可進行一次或數(shù)次,即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反響。Elisa 試劑盒可用于生物樣本分析。平湖腎素(REN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
根據(jù)檢測目標的不同,ELISA試劑盒可以分為幾種類型,包括直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA和競爭ELISA。直接ELISA是蕞簡單的一種,適用于快速檢測抗原;間接ELISA則通過二級抗體增強信號,適合抗體的檢測。夾心ELISA則是通過兩個抗體夾住目標抗原,適用于大分子抗原的檢測,靈敏度高;競爭ELISA則適用于小分子抗原的檢測,通過競爭結(jié)合的方式進行定量分析。不同類型的ELISA試劑盒各有優(yōu)缺點,研究人員可以根據(jù)實驗需求選擇合適的試劑盒,以獲得比較好的實驗結(jié)果。杭州L選擇素(SELL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Elisa 試劑盒可用于檢測細胞表面蛋白。
再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結(jié)果,使測定方法達到很高的敏感度。ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。然而,影響Elisa試驗結(jié)果的因素很多,故加強各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點。
elisa試劑盒試劑盒用于盛放檢測化學成分、藥物殘留、病毒種類等化學試劑的盒子。一般的醫(yī)院、制藥企業(yè)使用。完整的elisa試劑盒試劑盒包含以下各組分:(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)酶標記的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);(5)結(jié)合物及標本的稀釋液;(6)洗滌液,在板式elisa試劑盒中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;(7)酶反應終止液,常用的HRP反應終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的較為終體積而異,在板式elisa試劑盒中一般采用3mol/L。Elisa 試劑盒在生物檢測領(lǐng)域地位重要。
現(xiàn)在常用的幾種ELISA辦法有:測定抗體的直接法,測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本試驗選用直接法測定單克隆抗體效價。其主要進程為:首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反響板的凹孔內(nèi),加待測抗體,保溫后洗刷以除掉未結(jié)合的雜蛋白質(zhì),加酶標抗抗體,保溫后洗刷,加底物保溫30分鐘后,加酸或堿中止酶促反響,用目測或光電比色測定抗體含量。二、試驗意圖1.深化了解ELISA試劑盒法測定抗體效價的原理。2.把握ELISA法測定單克隆抗體效價的辦法。Elisa試劑盒一般包括酶標板、緩沖液、底物和標準物等多種元素。東臺表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白D(SPD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Elisa 試劑盒可對樣本進行定量檢測。平湖腎素(REN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
elisa試劑盒檢定中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部,避免針眼壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。加標本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。平湖腎素(REN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)