使每條染色體的著絲點排列在細(xì)胞中間的一個平面上。這個平面與紡錘體的中軸相垂直，類似于地球上赤道的位置，所以叫做赤道板。分裂中期的細(xì)胞，染色體的形態(tài)比較固定，數(shù)目比較清晰，便于觀察清楚。后期細(xì)胞分裂的后期，每一個著絲點分裂成兩個，原來連接在同一個著絲點上的兩條姐妹染色單體也隨著分離開來，成為兩條子染色體。紡錘絲牽引著子染色體分別向細(xì)胞的兩極，使細(xì)胞的兩極各有一套染色體。這兩套染色體的形態(tài)和數(shù)目是完全相同的，每一套染色體與分裂以前的親代細(xì)胞中的染色體的形態(tài)和數(shù)目是相同的。末期當(dāng)這兩套染色體別到達(dá)細(xì)胞的兩極以后，每條染色體的形態(tài)發(fā)生變化，又逐漸變成細(xì)長而盤曲的絲。同時，紡錘絲逐漸消失，出現(xiàn)新的核膜和核仁。核膜把染色體包圍起來，形成了兩個新的細(xì)胞核。這個時候，在赤道板的位置出現(xiàn)了一個細(xì)胞板,細(xì)胞板由細(xì)胞的中間向四周擴(kuò)展，逐漸形成了新的細(xì)胞壁。然后，一個細(xì)胞分裂成為兩個子細(xì)胞。大多數(shù)子細(xì)胞進(jìn)入下一個細(xì)胞周期的分裂間期狀態(tài)。動物細(xì)胞有絲分裂的過程，與植物細(xì)胞的基本相同。不相同的特點是：第1，動物細(xì)胞有中心體，在細(xì)胞分裂的間期，中心體的兩個中心粒各產(chǎn)生了一個新的中心粒，因而細(xì)胞中有兩組中心粒。生物藥物開發(fā)與優(yōu)化，涵蓋抗體藥物、疫苗等，通過高通量篩選、結(jié)構(gòu)生物學(xué)等手段，提升藥物效力與安全性。吉林本地科研技術(shù)服務(wù)平臺

    實驗原理慢病毒載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┺D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的輔助蛋白。外殼糖蛋白識別并宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白病毒復(fù)制所需要的酶試驗流程1.細(xì)胞準(zhǔn)備HEK-293T細(xì)胞提前一天鋪板，每10cm細(xì)胞培養(yǎng)皿接種3~5×106cells，置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)18h～24h后，轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度80%左右。注意：細(xì)胞消化要充分，成團(tuán)生長的細(xì)胞會影響轉(zhuǎn)染效率。細(xì)胞狀態(tài)對于病毒包裝至關(guān)重要，保證細(xì)胞良好狀態(tài)（實驗成功的關(guān)鍵因素），無支原體污染。2.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染（4-5天）將包裝質(zhì)粒和GFPControlPlasmid（或陰性對照質(zhì)?；蚰康幕蚵《据d體質(zhì)粒）共轉(zhuǎn)染入293T包裝細(xì)胞中。以下操作均以10cmdish，轉(zhuǎn)染試劑采用simplefect為例，其他轉(zhuǎn)染試劑和轉(zhuǎn)染時質(zhì)粒用量需根據(jù)培養(yǎng)器皿的規(guī)格進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。（1）轉(zhuǎn)染前1~2h將需要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞更換新鮮的培養(yǎng)基（DMEM+5%FBS），8mL/10cm皿。（2）按下表配制轉(zhuǎn)染體系，吹打混勻。（三質(zhì)粒比例4:3:1）（3）按照DNA：simplefect=1:(12+9+3)×，加入并吹打混勻，室溫靜置20min形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物。（4）取轉(zhuǎn)染復(fù)合物，逐滴添加到培養(yǎng)皿中，呈“十”或“8”字形輕輕搖晃混勻。。海南專業(yè)科研技術(shù)服務(wù)設(shè)計動物模型構(gòu)建服務(wù)，根據(jù)研究需求定制疾病模型，如心血管疾病等，為藥物篩選和功能驗證提供可靠平臺。

    5）轉(zhuǎn)染6-8h后更換7ml不含雙抗的新鮮培養(yǎng)基（DMEM+10%FBS）。（此時棄去的培養(yǎng)基中已含有少量的病毒，廢液以及所用的移液槍頭必須經(jīng)處理后才能丟棄）（6）換液后48h，用移液槍從培養(yǎng)皿的一側(cè)收集上清液到15mL離心管，3000r/min離心5min并用，過濾后的細(xì)胞上清液如果暫時不進(jìn)行進(jìn)一步處理，可分裝后置于-80℃冰箱保存。注意：通常細(xì)胞轉(zhuǎn)染24h后就可以看到熒光蛋白的表達(dá)，293T細(xì)胞會明顯的皺縮成圓形，48h可以進(jìn)行熒光照片的采集，判斷轉(zhuǎn)染效率。一般為了能獲得高滴度的病毒，需要通過不斷優(yōu)化條件，提高轉(zhuǎn)染效率。優(yōu)化條件包括：細(xì)胞培養(yǎng)條件，轉(zhuǎn)染試劑的優(yōu)化，三質(zhì)粒比例的優(yōu)化（1:1:1）等3.慢病毒的濃縮與純化（提高病毒滴度和純度）采用PEG8000方法濃縮病毒（1）5×PEG8000-NaCl配制：稱取NaClg;PEG800050g溶解在200mL純水中；121℃30min濕熱滅菌；保存在4℃；（2）每30ml過濾后的粗病毒液，加入5×PEG8000-NaCl母液mL；（3）每20～30min混合一次，共進(jìn)行3-5次，4℃放置過夜；（4）4℃，4000g，離心20min；（離心后可以直接看到病毒沉淀）（5）吸棄上清，靜置管子1～2min，吸走殘余液體；（吸走液體時要小心，不要吸走了沉淀）。

    一.細(xì)胞復(fù)蘇1、提前準(zhǔn)備完全培養(yǎng)基并預(yù)熱至37℃（可以放至在水浴或培養(yǎng)箱中進(jìn)行預(yù)熱，需要多少預(yù)熱多少，反復(fù)預(yù)熱會導(dǎo)致培養(yǎng)基失活）；用清洗潔凈的燒杯或其他合適容器裝有適量超純水，然后放入37-38℃水浴鍋中預(yù)熱至37℃（至少需30min）；把所需耗材和其他物品放置于超凈工作臺中紫外照射滅菌；2、提前查詢所取凍存管的存放位置，把整個存儲架子提起，為了降低復(fù)溫對其它細(xì)胞的影響，可把該存儲架子放置于裝有液氮的泡沫盒中，快速（存儲架離開液氮罐的時間不要超過1分鐘，否則其余細(xì)胞容易復(fù)溫死亡，凍存管子的液氮會氣化）從液氮罐中取出凍存管并放置于裝有液氮的保溫杯中(必須用用潔凈鑷子取出凍存管，以免手)，立即把存儲架回液氮罐；用鑷子把剛才置于保溫杯的凍存管取出，并立即（不要耽擱）放入上述準(zhǔn)備好的水浴中（放入之前快速檢查蓋子是否擰緊，蓋子切勿沒入水中，以免進(jìn)水污染），用鑷子鑷好凍存管，快速沿著容器內(nèi)壁轉(zhuǎn)圈，細(xì)胞未凍融時（1min內(nèi)）切勿取出觀察，細(xì)胞凍融時間一般為1-2min，如果超過2min仍未凍融，應(yīng)棄用該管細(xì)胞，凍融后立即用70%酒精消毒該凍存管，然后立即放入超凈工作臺中；3、打開凍存管蓋，用移液管吹打細(xì)胞3次。生物標(biāo)志物監(jiān)測服務(wù)，持續(xù)跟蹤患者體內(nèi)生物標(biāo)志物變化，評估疾病進(jìn)展與療愈效果。

    為了減少擴(kuò)增突變的引入，推薦使用高保真PCRMix進(jìn)行擴(kuò)增，推薦使用預(yù)線性化的質(zhì)粒作為模板，以減少環(huán)狀質(zhì)粒模板殘留對克隆陽性率的影響。注意：以環(huán)狀質(zhì)粒為模板時，PCR產(chǎn)物需要使用DpnI等甲基化敏感型限制性內(nèi)切酶對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行處理，或?qū)Ξa(chǎn)物進(jìn)行膠回收純化。2.插入片段制備引物設(shè)計原則：通常使用PCR擴(kuò)增的方法來獲得目的片段，PCR引物的5'端必須包含與其相鄰片段（插入片段或載體）末端同源的15~25nt（推薦18nt）序列,以保證擴(kuò)增產(chǎn)物的5'端和3'端分別與相鄰片段形成重疊序列。目的片段PCR引物包括：載體與插入片段連接處引物、插入片段與片段連接處引物。插入片段正向擴(kuò)增引物：5'—上游載體末端正向同源序列+酶切位點（可選）+基因特異性正向擴(kuò)增序列—3’插入片段反向擴(kuò)增引物：3‘—基因特異性反向擴(kuò)增序列+酶切位點（可選）+下游載體末端反向同源序列—5’載體與插入片段、插入片段與片段連接處引物、載體反向擴(kuò)增引物設(shè)計制作終序列圖譜引物設(shè)計工具1.在線設(shè)計更加專業(yè)，這款軟件用來繪制圖譜，編輯序列，設(shè)計引物，重組克隆都非常方便3.無縫克隆1、體系配制；a.適載體用量（ng）=×載體堿基對數(shù)，即pmol（單片段、多片段適用）；b.適片段用量。心血管功能評估系統(tǒng)，利用無創(chuàng)技術(shù)監(jiān)測心臟結(jié)構(gòu)與功能，評估心血管疾病風(fēng)險與療愈效果。黑龍江提供科研技術(shù)服務(wù)GPM實驗室

微生物群落分析，運(yùn)用16S rRNA測序技術(shù)，解析生物體內(nèi)外微生物多樣性，探索微生物與宿主健康的關(guān)系。吉林本地科研技術(shù)服務(wù)平臺

    基因敲除細(xì)胞構(gòu)建基因敲除細(xì)胞構(gòu)建服務(wù)（DH0009）一、服務(wù)介紹1、從靶點篩選到細(xì)胞株構(gòu)建一站式服務(wù)。2、采用慢病毒系統(tǒng)構(gòu)建，基因整合穩(wěn)定。3、保證干擾效率大于80%（以RT-PCR檢測靶基因mRNA表達(dá)結(jié)果為依據(jù)）。4、根據(jù)您的需要可以提供經(jīng)濟(jì)實惠的多克隆細(xì)胞系或者的單克隆細(xì)胞系。具體細(xì)胞系選擇請見相關(guān)介紹二、服務(wù)內(nèi)容及價格服務(wù)編號服務(wù)內(nèi)容服務(wù)價格服務(wù)周期（工作日）DH0009-1CRISPR/Cas9基因敲除咨詢咨詢DH0009-2sh細(xì)胞敲除構(gòu)建咨詢咨詢DH0009-3其它三、客戶提供1.客戶需提供生長狀態(tài)良好的細(xì)胞株及其他專門的實驗材料2.干擾靶基因GeneID或mRNA序列。3.目的基因功能相關(guān)參考文獻(xiàn)及其他您認(rèn)為有參考價值的資料。4.實驗前，客戶需告知具體的細(xì)胞處理方式及詳細(xì)要求。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關(guān)材料（具有保密性的材料除外）。四、服務(wù)流程1.載體構(gòu)建、2.靶點篩選、3.干擾效率驗證4.穩(wěn)定細(xì)胞篩選和克隆5.撰寫實驗報告五、提交給客戶結(jié)果1、完整實驗報告內(nèi)容：2、慢病毒載體構(gòu)建報告及測序結(jié)果；3、干擾靶點篩選報告；4、穩(wěn)定細(xì)胞系篩選實驗報告5、已構(gòu)建慢病毒RNA干擾載體；6、多克隆細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)提供目的基因敲減細(xì)胞株及表達(dá)對照細(xì)胞株各一株。吉林本地科研技術(shù)服務(wù)平臺