為了制備cDNA 探針，首先需分離純化相應(yīng)mRNA，這從含有大量mRNA的組織、細(xì)胞中比較容易做到，如從造血細(xì)胞中制備α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，就可以合成與之互補(bǔ)的DNA(即cDNA)，cDNA與待測(cè)基因的編碼區(qū)有完全相同的堿基順序，但內(nèi)含子已在加工過(guò)程中切除。寡核苷酸探針是人工合成的，與已知基因DNA互補(bǔ)的，長(zhǎng)度可從十幾到幾十個(gè)核苷酸的片段。如*知蛋白質(zhì)的氨基酸順序量，也可以按氨基酸的密碼推導(dǎo)出核苷酸序列，并用化學(xué)方法合成。主要用來(lái)分析固體物質(zhì)表面的細(xì)小顆粒或微小區(qū)域，小范圍直徑為1μm左右。長(zhǎng)寧區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針按需定制

早期采用的RNA探針是細(xì)胞mRNA探針和病毒RNA探針，這些RNA是在細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄或病毒復(fù)制過(guò)程中得到標(biāo)記的，標(biāo)記效率往往不高，且受到多種因素的制約。這類(lèi)RNA探針主要用于研究目的，而不是用于檢測(cè)。例如，在篩選逆轉(zhuǎn)錄病毒人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）的基因組DNA克隆時(shí)，因無(wú)DNA探針可利用，就利用HIV的全套標(biāo)記mRNA作為探針，成功地篩選到多株HIV基因組DNA克隆。又如進(jìn)行中的轉(zhuǎn)錄分析（nuclearrunontranscrip－tionassay）時(shí)，在體外將細(xì)胞核分離出來(lái)，然后在α-32P-ATP的存在下進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，所合成mR－NA均摻入同位素而得到標(biāo)記，此混合mRNA與固定于硝酸纖維素濾膜上的某一特定的基因的DNA進(jìn)行雜交，便可反映出該基因的轉(zhuǎn)錄狀態(tài)，這是一種反向探針實(shí)驗(yàn)技術(shù)。虹口區(qū)特制探針五星服務(wù)掃描電子探針儀是美國(guó)于1960年制成，不僅能對(duì)試樣作點(diǎn)或微區(qū)分析，而且能對(duì)樣品表面微區(qū)進(jìn)行掃描。

②隨機(jī)引物法。隨機(jī)引物是指含有各種可能排列順序的寡聚核苷酸片斷的混合物，因此它可以與任意核苷酸序列雜交，起到聚合酶反應(yīng)的引物作用。將待標(biāo)記的DNA探針片斷變性后與隨機(jī)引物一起雜交，然后以此雜交的寡聚核苷酸為引物，在大腸桿菌DNA聚合酶I大斷段（KlenowFragment）催化下，合成與探針DNA互補(bǔ)的DNA鏈，當(dāng)在反應(yīng)體系中含有a-32P-dNTP時(shí)，即形成放射性同位素標(biāo)記的DNA探針。具有上述優(yōu)點(diǎn)，可代替缺口平移法。此外大小、單雙DNA均可標(biāo)記，標(biāo)記均勻，標(biāo)記率高，但也不能標(biāo)記環(huán)狀DNA。隨機(jī)引物法標(biāo)記探針一般長(zhǎng)400~600bp。

血凝素與生物素有非常高的親和性，當(dāng)血凝素標(biāo)記上過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶，經(jīng)雜交反應(yīng)**終形成探針-生物素-血凝素酶復(fù)合物（ABC法），酶催化底物顯色，觀察結(jié)果。ABC法底物顯色生成不溶物，以便觀測(cè)結(jié)果。酶標(biāo)記法復(fù)雜、重復(fù)性差，成本高，但便于運(yùn)輸、保存，靈敏度與放射物標(biāo)記法相當(dāng)。探針標(biāo)記方法①缺口平移標(biāo)記法。利用的是DNA聚合酶I能修復(fù)DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機(jī)切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸，同時(shí)在3´端修復(fù)加入被標(biāo)記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡(jiǎn)便、成本相對(duì)較低、比活性相對(duì)較高、標(biāo)記均勻，多用于大分子DNA標(biāo)記，(>1000bp比較好)，但單鏈DNA、RNA不能用該法標(biāo)記。電子探針是運(yùn)用電子所形成的探測(cè)針（細(xì)電子束）作為X射線的激發(fā)源來(lái)進(jìn)行顯微X射線光譜分析的儀器。

值得一提的是，通過(guò)改變外源基因的插入方向或選用不同的RNA聚合酶，可以控制RNA的轉(zhuǎn)錄方向，即以哪條DNA鏈以模板轉(zhuǎn)錄RNA。這種可以得到同義RNA探針（與mRNA同序列）和反義RNA探針（與mRNA互補(bǔ)），反義RNA又稱(chēng)cRNA，除可用于反義核酸研究外，還可用于檢測(cè)mRNA的表達(dá)水平。在這種情況下，因?yàn)樘结樅桶行蛄芯鶠閱捂?，所以雜交的效率要比DNA-DNA雜交高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。RNA探針除可用于檢測(cè)DNA和mRNA外，還有一個(gè)重要用途，在研究基因表達(dá)時(shí)，常常需要觀察該基因的轉(zhuǎn)錄狀況。分析元素從原子序數(shù)3（鋰）至92（鈾）。感量可達(dá)10-14至10-15g。松江區(qū)質(zhì)量探針商家

對(duì)于任意一個(gè)給定的入射角θ有一個(gè)確定的波長(zhǎng)λ滿(mǎn)足衍射條件。長(zhǎng)寧區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針按需定制

電子探針?lè)治鍪侵敢跃劢沟母咚匐娮觼?lái)激發(fā)出試樣表面組成元素的特征X射線，對(duì)微區(qū)成分進(jìn)行定性或定量分析的一種材料物理試驗(yàn)，又稱(chēng)電子探針X射線顯微分析。電子探針?lè)治龅脑硎牵阂詣?dòng)能為10～30千電子伏的細(xì)聚焦電子束轟擊試樣表面，擊出表面組成元素的原子內(nèi)層電子，使原子電離，此時(shí)外層電子迅速填補(bǔ)空位而釋放能量，從而產(chǎn)生特征X射線。電子探針的功能主要是進(jìn)行微區(qū)成分分析。它是在電子光學(xué)和X射線光譜學(xué)原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種高效率分析儀器。其原理是用細(xì)聚焦電子束入射樣品表面，激發(fā)出樣品元素的特征x射線，分析特征X射線的波長(zhǎng)（或特征能量）即可知道樣品中所含元素的種類(lèi)（定性分析），分析X射線的強(qiáng)度，則可知道樣品中對(duì)應(yīng)元素含量的多少（定量分析）。長(zhǎng)寧區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針按需定制

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