導(dǎo)語(yǔ)對(duì)于大部分科研人員來(lái)說(shuō)，研究中一般用到均是現(xiàn)成的細(xì)胞系/株，我們只需要：進(jìn)行細(xì)胞傳代和保種。然而，這些細(xì)胞系常常由于體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，而丟失原有生物學(xué)特性，對(duì)藥物處理的反應(yīng)差距越來(lái)越大。因此，原代細(xì)胞的地位日漸凸顯，Paper中若有了原代細(xì)胞的數(shù)據(jù)都會(huì)添色不少。然而，就小編親生經(jīng)歷，原代細(xì)胞分離著實(shí)是個(gè)技術(shù)活，結(jié)合自身經(jīng)驗(yàn)，為大家介紹：組織和正常組織的原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)方法。原代細(xì)胞的基本知識(shí)1.什么是原代細(xì)胞培養(yǎng)?原代細(xì)胞（Primarycells）：是指直接從機(jī)體取出的組織或細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞。這里的組織主要指：組織、外周血及胚胎等。原代細(xì)胞培養(yǎng)：由于原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，繁殖一定的代數(shù)停止生長(zhǎng)（一般10代以內(nèi)）。所以一般認(rèn)為：培養(yǎng)的原代的第1和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。2.原代細(xì)胞與細(xì)胞系（celllines）的區(qū)別原代細(xì)胞和細(xì)胞系的比較：PrimarycellsCelllines增殖能力較弱強(qiáng)繁殖代數(shù)一般只能傳10代以內(nèi)無(wú)限增殖，50代左右遺傳物質(zhì)完整性遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)發(fā)生改變生物特性接近臨床樣本偏離臨床樣本培養(yǎng)容易程度比較復(fù)雜簡(jiǎn)單。本公司分離的SD大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞取自新鮮的組織材料，并且按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行原代細(xì)胞的分離和培養(yǎng)。寧夏組織原代細(xì)胞

限位槽410用于承載限位彈簧420，限位彈簧420用于承載固定桿430，固定桿430用于固定培養(yǎng)皿本體；請(qǐng)?jiān)俅螀㈤唸D1，一號(hào)培養(yǎng)板200和二號(hào)培養(yǎng)板300的前表面左側(cè)設(shè)置有縱向標(biāo)尺500，一號(hào)培養(yǎng)板200和二號(hào)培養(yǎng)板300的前表面左側(cè)設(shè)置有橫向標(biāo)尺510，一號(hào)培養(yǎng)板200和二號(hào)培養(yǎng)板300的頂部設(shè)置有防護(hù)蓋520，具體的，一號(hào)培養(yǎng)板200和二號(hào)培養(yǎng)板300的前表面左側(cè)粘接有縱向標(biāo)尺500，一號(hào)培養(yǎng)板200和二號(hào)培養(yǎng)板300的前表面左側(cè)粘接有橫向標(biāo)尺510，防護(hù)蓋520卡接在一號(hào)培養(yǎng)板200和二號(hào)培養(yǎng)板300的頂部，橫向標(biāo)尺510用于橫向標(biāo)記，縱向標(biāo)尺500用于縱向標(biāo)記，防護(hù)蓋520用于無(wú)菌保護(hù)。工作原理：在可以分離的細(xì)胞培養(yǎng)板使用的過(guò)程中，通過(guò)底座100、一號(hào)培養(yǎng)板200、梯形卡槽210、二號(hào)培養(yǎng)板300、梯形卡塊310和固定螺絲220的配合，實(shí)現(xiàn)了方便拆卸，且連接更加穩(wěn)定，通過(guò)橫向標(biāo)尺510和縱向標(biāo)尺500的配合，方便標(biāo)號(hào)對(duì)比，提高了效率。雖然在上文中已經(jīng)參考實(shí)施方式對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行了描述，然而在不脫離本實(shí)用新型的范圍的情況下，可以對(duì)其進(jìn)行各種改進(jìn)并且可以用等效物替換其中的部件。尤其是，只要不存在結(jié)構(gòu)，本實(shí)用新型所披露的實(shí)施方式中的各項(xiàng)特征均可通過(guò)任意方式相互結(jié)合起來(lái)使用。寧夏大鼠原代細(xì)胞服務(wù)具有多種原代細(xì)胞，包含人源細(xì)胞、大鼠細(xì)胞、小鼠細(xì)胞。

原標(biāo)題：原代細(xì)胞培養(yǎng)難？有這一篇就夠了！導(dǎo)語(yǔ)原代細(xì)胞培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的，其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持，給大家?guī)?lái)原代細(xì)胞培養(yǎng)的一些技巧，希望大家能有所收獲！原代細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用1、為研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的手段；2、為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；3、服務(wù)于臨床實(shí)踐，用于藥物篩選等。原代細(xì)胞培養(yǎng)之取材取材作為原代細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的至關(guān)重要，以下幾種取材技術(shù)，你都用過(guò)哪些方法呢？兔髓核原代細(xì)胞培養(yǎng)之分離注意事項(xiàng)1、組織塊培養(yǎng)法1）組織塊接種后，在觀察和移動(dòng)的過(guò)程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng)，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。2）加入的培養(yǎng)液不宜過(guò)多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來(lái)。3）當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來(lái)后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。4）為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。2、貼壁型原代細(xì)胞1)原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí)，它們之間會(huì)互相影響，在這些細(xì)胞之間能產(chǎn)生一些促生長(zhǎng)的活性物質(zhì)，使細(xì)胞彼此互相促進(jìn)存活和生長(zhǎng)。

同時(shí)解決了植物細(xì)胞對(duì)水、營(yíng)養(yǎng)物、滲透壓、酸堿度、微量元素等的需求。[2]微生物細(xì)胞培養(yǎng)微生物多為單細(xì)胞生物，野生生存條件比較簡(jiǎn)單。所以微生物人工培養(yǎng)的條件比動(dòng)植物細(xì)胞簡(jiǎn)單得多。其中厭氧微生物培養(yǎng)比好氧微生物復(fù)雜，因?yàn)閲?yán)格厭氧需要維持二氧化碳等非氧的惰性氣體濃度，而好氧微生物則只需要通過(guò)不斷攪拌提供無(wú)菌氧氣。微生物對(duì)培養(yǎng)條件要求不如動(dòng)植物細(xì)胞那樣苛刻，玉米漿、蛋白胨、麥芽汁、酵母膏等成為良好的微生物天然培養(yǎng)基。對(duì)于一些特殊微生物的營(yíng)養(yǎng)條件要求，可以在這些天然培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上額外添加。[2]細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境及條件編輯細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境因素1．無(wú)菌環(huán)境無(wú)毒和無(wú)菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件。細(xì)胞在內(nèi)，系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過(guò)程中，缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)而喪失對(duì)微生物的防御能力和對(duì)有害物質(zhì)的能力。為保證細(xì)胞能在體外環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖，必須要確保無(wú)菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無(wú)菌試劑和培養(yǎng)基以及無(wú)菌操作。常見的微生物污染有支原體、細(xì)菌。支原體無(wú)致死毒性，可與細(xì)胞長(zhǎng)期共存，對(duì)細(xì)胞有潛在影響，但體積小，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)菌增殖快。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自臍帶靜脈，一般用于生理學(xué)和藥理學(xué)研究。

所述鎖環(huán)套設(shè)于鎖塊上。采用上述各個(gè)技術(shù)方案，所述的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱中，所述外箱體的底部還設(shè)有若干萬(wàn)向腳輪。采用上述各個(gè)技術(shù)方案，所述的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱中，所述外箱體的側(cè)部還設(shè)有方便推拉的扶手。采用上述各個(gè)技術(shù)方案，所述的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱中，所述外箱體內(nèi)設(shè)有3列中空的矩形槽，各所述矩形槽的兩側(cè)分別設(shè)有15層對(duì)稱的滑槽。采用上述各個(gè)技術(shù)方案，本實(shí)用新型通過(guò)將細(xì)胞培養(yǎng)皿存放在內(nèi)箱盒內(nèi)，在外箱體的矩形槽設(shè)置若干層對(duì)稱的滑槽，各內(nèi)箱盒可從滑槽的正面或背面存放于內(nèi)，提高了細(xì)胞培養(yǎng)箱的空間利用率；在內(nèi)箱盒內(nèi)設(shè)有紫外燈，紫外燈單獨(dú)照射于內(nèi)箱盒，使得細(xì)胞培養(yǎng)皿處于無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境，提高細(xì)胞培養(yǎng)的存活率；在內(nèi)箱盒的兩側(cè)分別設(shè)有滑輪及滑塊，滑輪的設(shè)置使得用戶可方便存取內(nèi)箱盒內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)皿，滑塊的設(shè)置使得內(nèi)箱盒在處于存放狀態(tài)時(shí)更加穩(wěn)固，防止內(nèi)箱盒滑脫至外；整體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、存儲(chǔ)方便，可推廣使用。附圖說(shuō)明圖1為本實(shí)用新型的正面立體結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本實(shí)用新型的背面立體結(jié)構(gòu)示意圖；圖3為本實(shí)用新型的外箱體結(jié)構(gòu)示意圖；圖4為本實(shí)用新型的內(nèi)箱盒閉合狀態(tài)結(jié)構(gòu)示意圖；圖5為本實(shí)用新型的內(nèi)箱盒打開狀態(tài)結(jié)構(gòu)示意圖。由于臍帶是分娩過(guò)程中的廢棄物，同時(shí)從臍帶中分離人臍靜脈平滑肌細(xì)胞方法相對(duì)成熟。寧夏大鼠原代細(xì)胞服務(wù)

臍帶是哺乳類連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)。臍帶中通過(guò)尿膜的血管即臍動(dòng)脈和臍靜脈。寧夏組織原代細(xì)胞

1)將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。(2)將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體完全融化。(3)將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無(wú)菌環(huán)境。(4)用70％的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。(5)打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋（注意，由于凍存管有負(fù)壓，開蓋時(shí)可能會(huì)有少量溢出，這是正?，F(xiàn)象）。(6)用多聚賴氨酸（或參照說(shuō)明書）包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細(xì)胞。(7)蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開蓋子。(8)將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中（37℃，5%CO2，95%空氣）(9)放入培養(yǎng)箱后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。5、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，多久更換一次培養(yǎng)基？這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。注意：凍存細(xì)胞復(fù)蘇后，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細(xì)胞。6、我能擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細(xì)胞嗎？這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長(zhǎng)緩慢的上皮細(xì)胞，不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。寧夏組織原代細(xì)胞